Что такое иммуногистохимия? - коротко
Иммуногистохимия — метод исследования тканей, при котором специфические антитела маркируются и позволяют визуализировать локализацию и количество целевых белков в клетках. Техника широко применяется в диагностике опухолей, исследовании патологических процессов и биомедицинских исследованиях.
Что такое иммуногистохимия? - развернуто
Иммуногистохимия — это метод лабораторного анализа, позволяющий обнаруживать и локализовать специфические белки в тканевых срезах с помощью антител, меченых различными маркерами. Принцип работы основан на высокой специфичности взаимодействия антиген‑антитело: к целевому молекулярному компоненту ткани добавляют первичное антитело, которое связывается с ним, а затем используют вторичное антитело, сопряжённое с ферментом, флуоресцентным красителем или радиоактивным изотопом. После реакций визуализируют место привязки, получая микроскопическое изображение, где распределение исследуемого белка ясно различимо.
Метод широко применяется в патологии для уточнения характера опухолевых образований, определения их происхождения и степени дифференцировки. Благодаря возможности различать экспрессию маркеров, такие как кератины, гормональные рецепторы, протеины клеточного цикла, иммуногистохимия помогает отличать, например, аденокарциному от плоскоклеточного рака, а также выявлять метастатические процессы. В гистологии она служит инструментом, позволяющим установить диагноз в случаях, когда морфологические признаки недостаточны.
Техника включает несколько ключевых этапов:
- Подготовка образца: фиксируют ткань (обычно формалином), затем внедряют в парафин и нарезают тонкие срезы толщиной 3–5 мкм.
- Дегидратация и дегидратация: срезы обрабатывают последовательными растворами, удаляя парафин и восстанавливая гидратацию.
- Эпитопный ректификация: применяется нагрев, ферменты или химические агенты, чтобы раскрыть скрытые эпитопы, недоступные без обработки.
- Блокировка неспецифических связей: используют сыворотку или специальные блокирующие растворы, минимизируя фоновые сигналы.
- Инкубация с антителами: первичное антитело добавляют к срезу и оставляют на определённое время, затем промывают и вводят вторичное антитело с маркером.
- Визуализация: в зависимости от выбранного маркера наблюдают под световым, флуоресцентным или электронным микроскопом, фиксируют полученные изображения.
Преимущества метода заключаются в высокой чувствительности, возможности одновременного исследования нескольких маркеров (мультиплексная иммуногистохимия) и относительной простоте выполнения в стандартных лабораториях. Ограничения включают потребность в качественных специфических антителах, риск ложноположительных результатов при недостаточной блокировке и ограниченную количественную оценку без применения цифровых систем анализа.
Современные разработки позволяют автоматизировать процесс, внедрять цифровую патологию и использовать новые типы маркеров, такие как наночастицы, расширяя спектр применений иммуногистохимии от клинической диагностики до фундаментальных исследований биологии тканей. Таким образом, метод остаётся незаменимым инструментом в медицине, биологии и смежных науках, обеспечивая точную идентификацию молекулярных компонентов в их естественном тканевом окружении.