Что такое ИФА анализ? - коротко
ИФА (иммуноферментный анализ) — лабораторный метод, позволяющий количественно определить наличие и концентрацию специфических белков, антител или гормонов в биологических образцах с помощью реакций антиген‑антитело и ферментативного сигнала. Метод широко применяется в диагностике заболеваний, контроле качества биопрепаратов и научных исследованиях.
Что такое ИФА анализ? - развернуто
ИФА (иммуноферментный анализ) — лабораторный метод, позволяющий количественно определить присутствие конкретных белков, гормонов, антител или антигенов в биологических образцах. Принцип работы основан на специфическом взаимодействии антител с целевым молекулой и последующем обнаружении реакционного продукта фермента, связанного с антителом.
Для получения результата используется несколько последовательных этапов. Сначала к твердой фазе (обычно микропланшету) фиксируют захватывающее антитело, которое специфически связывается с исследуемым веществом. После добавления образца целевой молекулы связываются с этим антителом, образуя комплекс. Затем вводят вторичное антитело, конъюгированное с ферментом (чаще всего HRP — пероксидазой), которое присоединяется к уже образованному комплексу. При добавлении субстрата фермент превращает его в окрашенный продукт, интенсивность которого пропорциональна количеству целевого аналита в пробе. Оптическая плотность измеряется спектрофотометром, после чего результаты сравнивают с калибровочной кривой, построенной на известных концентрациях.
Существует несколько вариантов ИФА, каждый из которых подходит под определённые задачи:
- Прямой — антитело, меченое ферментом, непосредственно связывается с анализируемым веществом; используется, когда требуется быстрый скрининг.
- Сэндвич — захватывающее антитело фиксируется на поверхности, к нему присоединяется исследуемый антиген, а затем добавляется ферментируемое вторичное антитело; идеален для измерения крупных молекул, таких как цитокины.
- Конкурентный — в образец вводят известное количество меченого аналога, который конкурирует с исследуемым веществом за ограниченное количество антител; применяется для небольших молекул, где невозможна фиксация двух антител одновременно.
Преимущества метода включают высокую чувствительность (детекция может достигать пикограмм на миллилитр), специфичность за счёт использования пар антител, возможность одновременного анализа множества образцов в микропланшетных форматах и относительную экономичность. Ограничения связаны с необходимостью тщательной калибровки, потенциальным перекрёстным реагированием антител, а также тем, что измерения могут быть подвержены влиянию матричных эффектов в сложных биологических жидкостях.
ИФА нашёл широкое применение в медицинской диагностике (определение гормонов, маркеров инфекций, уровней лекарств), в фармацевтических исследованиях (скрининг биофармацевтических препаратов), в ветеринарии, пищевой промышленности (контроль аллергенов) и в научных исследованиях, где требуется точный количественный анализ белков. Благодаря своей универсальности и адаптивности метод остаётся одним из основных инструментов биохимических и иммунологических лабораторий.